大鼠卵母細胞的采集及發(fā)育分型

大鼠超排可以用于研究環(huán)境污染物或藥物對生殖系統(tǒng)的毒性影響；通過誘導超排并觀察卵母細胞和胚胎的發(fā)育情況，可以評估潛在的生殖毒性。大鼠卵母細胞的發(fā)育過程可以分為3個階段：GV期、MI期、MⅡ期。

方法

1.雌性SD大鼠，腹腔注射PMSG 60IU，注射PMSG 46-48h后，腹腔注射hCG 20IU，誘導超排。

2.準備卵母細胞培養(yǎng)滴：在60mm培養(yǎng)皿內做若干水滴狀的滴，并用礦物油覆蓋，放入培養(yǎng)箱（37 ℃、5%CO2）平衡4h以上（推薦過夜平衡）。

3.卵母細胞采集的時間通常在SD大鼠注射hCG后13-16h內進行。

4.雌性SD大鼠背部、腹側備皮，酒精消毒背側、腹側皮膚。在距離大鼠脊柱1cm、肋下1cm的交叉位置剪開皮膚、肌肉，可見白色的脂肪組織，拉出脂肪組織，可見到粉紅色的卵巢，摘除卵巢及輸卵管，將其放入500μL的KSOM胚胎培養(yǎng)液液體中。

5.在體式顯微鏡下觀察到輸卵管的上部（壺腹部）有一個明顯的膨大處。用鑷子固定輸卵管，用一根1 ml注射器縱向撕開壺腹部，用此法將其整個撕裂，卵團會游離到KSOM胚胎培養(yǎng)液液體中。

6.在KSOM胚胎培養(yǎng)液中再加入同體積的透明質酸酶溶液（0.6mg/mL），用移液槍輕輕吹打幾下，放入CO2培養(yǎng)箱中，1分鐘后取出。

7.在顯微鏡下用移卵管收集卵母細胞到卵母細胞培養(yǎng)滴中，并用剩下的液滴逐步清洗，清洗結束后放回37℃ CO2培養(yǎng)箱中。

8. GV期、MI期、MⅡ期的卵母細胞。

GV期：這是卵母細胞生長和發(fā)育的早期階段，卵母細胞處于減數(shù)分裂的第一次分裂前期。

MI期：卵母細胞進入減數(shù)分裂的第一次中期。

MⅡ期：這是卵母細胞成熟的最終階段，卵母細胞準備好受精

注意事項：

大鼠的輸卵管不直接與卵巢相連，而是緊貼卵巢表面，呈彎彎曲曲的形狀。大鼠輸卵管可分為漏斗部、壺腹部、峽部和子宮部。