免疫共沉淀實驗

免疫共沉淀實驗
當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。當用預先固化在argarose beads上的蛋白質A的抗體免疫沉淀A蛋白，那么與A蛋白在體內結合的蛋白質B也能一起沉淀下來。再通過蛋白變性分離，對B蛋白進行檢測，進而證明兩者間的相互作用。

免疫共沉淀實驗（Co-Immunoprecipitation, Co-IP）是一種經典的生物化學技術，用于研究蛋白質之間的相互作用。其原理主要基于抗體和抗原之間的專一性結合作用。以下是對免疫共沉淀原理的詳細解釋：

一、基本原理

1. ?抗體與抗原的專一性結合?：免疫共沉淀利用抗體能夠特異性地識別并結合其對應抗原的特性。這種專一性結合是免疫共沉淀技術的基礎。

2. ?細胞裂解?：首先，細胞需要在非變性條件下被裂解，以保留細胞內蛋白質之間的相互作用。這樣，原本在細胞內相互結合的蛋白質在裂解后仍然保持結合狀態。

3. ?抗體與靶蛋白的結合?：將特異性的抗體加入到細胞裂解液中，抗體將與裂解液中的靶蛋白（即已知或待研究的蛋白質）形成抗原-抗體復合物。

4. ?復合物沉淀?：如果系統中存在與靶蛋白相互作用的蛋白質（稱為結合蛋白），這些結合蛋白也會與靶蛋白-抗體復合物結合，形成更大的蛋白質復合物。隨后，通過離心或其他物理方法，可以將這些復合物沉淀下來。

二、實驗步驟（簡要）

1. ?細胞裂解?：在非變性條件下裂解細胞，獲取細胞裂解液。

2. ?抗體結合?：在細胞裂解液中加入特異性的抗體，使抗體與靶蛋白結合形成復合物。

3. ?沉淀復合物?：通過離心或其他方法將蛋白質復合物沉淀下來。

4. ?洗脫與分析?：對沉淀物進行洗脫，去除非特異性結合的雜質，然后進行SDS-PAGE（十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳）及Western blotting等分析，以確定與靶蛋白相互作用的蛋白質。